1918年7月17日凌晨，伴随着叶卡捷琳堡地下室里的阵阵枪响。
俄罗斯末代沙皇尼古拉二世、皇后亚历山德拉、他们的五个孩子，以及四名仆从，在这里走向了生命的终点。
末代沙皇一家（1913年）
但是在之后近一个世纪里，始终有人不相信沙皇一家全部遇难
有人说，阿列克谢逃了出去；有人说，安娜斯塔西娅公主奇迹生还；
甚至后来有超过多人声称自己是“幸存的罗曼诺夫子女”。
其中最有名的，就是安娜·安德森。她声称自己是安娜斯塔西娅，并让很多人相信了这个故事。
数十年后，随着遗骸的出土，现代Dna技术破解了这个谜题
第一座墓穴：找到9具遗骸，却少了两个孩子
20世纪70年代末，地质学家亚历山大·阿夫多宁在叶卡捷琳堡附近找到了一个墓穴，结合各种历史资料，极大概率是末代沙皇一家的埋骨处。
但当时仍是苏联时期，他不敢公开这个发现。直到1991年苏联解体后，这处墓穴才被正式公布。
随后挖掘工作正式启动——考古人员从墓中挖出了9具遗骸。
根据历史记录，当年遇害的一共有11人：沙皇尼古拉二世、皇后亚历山德拉、五个孩子，以及四名仆从。
可是墓里只有9具。
经过DNA检测，科学家确认：这9具遗骸中包括沙皇、皇后，以及三位女儿和四位仆从。
但是皇太子阿列克谢和另一位公主不在其中。
早期的DNA检测主要做了几类比对。
第一，是常染色体STR ——通过常染色体STR技术成功将沙皇一家（沙皇夫妇和三位公主）和四位仆人区分开来。
第二，是通过母系遗传的线粒体DNA, 也就是mtDNA
皇后亚历山德拉方面：科学家用英国菲利普亲王的DNA作为参考，因为他是皇后亚历山德拉大姐维多利亚的外孙。
检测结果显示，皇后和三位女儿的遗骸，与菲利普亲王的母系DNA关系吻合。
菲利普亲王
而尼古拉二世方面：科学家找到了尼古拉的两位母系亲属——
英国第三代法夫公爵詹姆斯：他是尼古拉大姨亚历山德拉王后的曾外孙。
谢尼娅女伯爵：她是尼古拉二世大妹妹谢尼娅的外曾孙女。
然而变故陡生，这两位亲属在在16169位点均为纯合T
而尼古拉二世的线粒体DNA在16169位点存在异质性——简单来说，就是同一个位置上同时出现了C和T两种碱基。
这在当时非常少见，也引发了巨大争议。
面对这一争议，俄罗斯人简单粗暴，
他们打开了1899年去世的尼古拉二世的弟弟——格奥尔基大公的棺椁，取出他的样本进行检测
尼古拉兄弟俩和父母的合照
结果发现，两兄弟在同一个位置都有这种特殊异质性；这成为确认沙皇身份的重要证据。
1998年，俄罗斯政府为挖出来的五具末代沙皇一家的骸骨，举行了国葬。
参与第一次Dna检测几人之间的家族树
第二座墓穴：70米外的两具骸骨
2007年夏天，一群业余考古爱好者在第一座墓穴附近约70米处，发现了新的骨骼碎片。
随后，官方进行了正式发掘：这次发现的遗骸非常破碎，共有44块骨骼和牙齿碎片。
人类学分析显示，这些遗骸至少属于两个人：
一个是大约15至19岁的女性；另一个很可能是12至15岁的男性。
这个年龄范围，正好对应罗曼诺夫家族失踪的两个孩子：皇太子阿列克谢，以及另一位公主（可能是玛丽亚或者安娜斯塔西娅）。
玛丽亚和阿列克谢
但是，仅靠年龄和骨骼判断还不够，真正决定性的证据，仍然是DNA。
科学家对2007年第二墓穴中的遗骸进行了三类DNA检测：线粒体DNA、常染色体STR、Y-STR。
第二墓穴中的两具遗骸，线粒体DNA与皇后亚历山德拉及第一墓穴中的三位公主完全吻合。这说明他们来自同一个母系家族。
常染色体STR可以用来判断亲子关系和兄弟姐妹关系：
检测结果显示，第二墓穴中的男性样本和女性样本，是兄弟姐妹的可能性比毫无关系高出560万倍。
更重要的是，他们的DNA完全符合尼古拉二世和亚历山德拉作为父母时的遗传规律。
统计结果显示：女性样本是沙皇夫妇女儿的可能性，为4.36万亿倍；男性样本是沙皇夫妇儿子的可能性，超过80万亿倍。
这个男性样本，几乎可以确认就是皇太子阿列克谢。
而Y-STR只通过父系男性传递。因此科学家检测了三个人的Y染色体：
2007年发现的墓穴中的男性遗骸；尼古拉二世的牙齿；
一位现存罗曼诺夫男性后裔：尼古拉二世的侄子安德烈
结果显示，三人的17个Y-STR位点完全一致；这意味着第二墓穴中的男孩，确实来自罗曼诺夫父系血脉。
Y染色体家族树
2015年：再次开棺验尸
即使已经多方验证，1991年墓穴里确实出土了尼古拉二世的遗骸，
但是俄罗斯东正教会仍对遗骸的真实性感到质疑。
2015年11月，俄罗斯政府再次打开了了尼古拉二世和妻子亚历山德拉皇后的坟墓。重新提取了夫妇二人的DNA。
结果证明：沙皇下颈椎骨和下颌骨的碎片与尼古拉二世被刺杀的祖父亚历山大二世衣服上的血迹相吻合。
沙皇亚历山大二世
而亚历山德拉的线粒体也和一位不愿意透露姓名的维多利亚女王后代的信息相吻合。
在末代沙皇死后的数十年间年里，无数传言、冒名者和阴谋论不断出现；沙皇的母亲至死都不愿意相信儿子被杀，然而DNA证明了这一切——
1918年7月17日凌晨，俄罗斯末代沙皇一家，无一幸存。
俄罗斯可能也曾打开尼古拉二世之父亚历山大三世的棺椁与尼古拉二世进行Dna检测。
四位女大公中，由于年龄接近，玛丽亚和安娜斯塔西亚的骸骨始终无法被准确区分。